據(jù)《自然·生物技術(shù)》雜志日前發(fā)表的論文，CRISPR-Cas9基因編輯系統(tǒng)的新改進(jìn)，使設(shè)計用于治療的大量細(xì)胞變得更加容易。美國格萊斯頓研究所和加州大學(xué)舊金山分校開發(fā)的新方法，能以非常高的效率將特別長的DNA序列引入細(xì)胞基因組中精確位置，而無需傳統(tǒng)的病毒遞送系統(tǒng)。該成果是向下一代安全有效的細(xì)胞療法邁出的一大步。

　　格萊斯頓研究所最新證明，新方法可在一次運行中設(shè)計超過10億個細(xì)胞，這遠(yuǎn)高于治療個體患者所需的細(xì)胞數(shù)量。

　　此前人們已知DNA可單鏈或雙鏈存在，Cas9附著在雙鏈DNA上。研究發(fā)現(xiàn)，高水平的雙鏈DNA模板會對細(xì)胞產(chǎn)生毒性，因此該方法只能用于少量模板DNA，導(dǎo)致效率低下。

　　但即使在相對較高的濃度下，單鏈DNA對細(xì)胞的毒性也較小。鑒于此，研究團隊研發(fā)了一種將修飾的Cas9酶連接到單鏈模板DNA的方法，即在末端添加一小段雙鏈DNA突出端。

　　與舊的雙鏈方法相比，單鏈模板DNA可將基因編輯效率提高一倍以上。分子的雙鏈末端讓研究人員可使用Cas9來增強非病毒載體向細(xì)胞的傳遞。

　　現(xiàn)在，研究人員可以使用新的DNA模板生成超過10億個針對多發(fā)性骨髓瘤的CAR-T細(xì)胞。CAR-T細(xì)胞是經(jīng)過基因改造的免疫T細(xì)胞，可有效對抗特定細(xì)胞或癌癥。使用新的單鏈Cas9定向模板，大約一半的T細(xì)胞獲得了新基因，并因此轉(zhuǎn)化為CAR-T細(xì)胞。

　　此外研究還表明，新方法首次可完全替換與罕見遺傳免疫疾病相關(guān)的兩個基因——IL2RA和CTLA4基因。這種“一刀切”的方法可治療這些基因中具有不同突變的許多患者，而不必為每個患者的突變生成個性化模板。用這種基因工程方法處理的細(xì)胞中，有近90%獲得了健康版本的基因。